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La Withania somnifera Dunal (Ashwagandha) è una pianta medicinale indiana con importanti proprietà farmacologiche come effetti adattogeni, antiossidanti, ipoglicemizzanti e antistress. Diversi dei suoi chemiotipi includono NMITLI-101, NMITLI-118, NMITLI-128. Il presente lavoro elabora studi fitochimici e analitici su NMITLI118RT+ un farmaco candidato sotto l'egida del CSIR (derivato da un nuovo chemiotipo di W. somnifera). Qui riportiamo lo sviluppo, la validazione e l'applicazione di un metodo HPLC isocratico semplice, rapido e affidabile per la quantificazione del Withanolide A nel NMITLI118RT+ su una colonna CN che utilizza il gliclazide come standard interno, in grado di rilevare il Withanolide A a circa 3,8 min e il gliclazide (standard interno) a circa 4,8 min con un intervallo di linearità di 2-20 µg/mL. Un secondo metodo riporta lo sviluppo e la validazione di un metodo isocratico semplice per la stima simultanea del Withanolide A e del Withanone (marcatori sesquiterpenici lattonici) stabilito su una colonna C-18; 3µ che ha potuto rilevare il Withanolide A e il Withanone a tempi di ritenzione di circa 20,7 min e 21,6 min rispettivamente nell'intervallo di linearità di 2-50 µg/mL per entrambi.