Expression, Aufreinigung und Charakterisierung von rhCTGF und rrNOV
Profunde Biochemie möglicher profibrotischer Markerproteine aus der CCN Familie
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Die Familie der CCN-Proteine wird derzeit von 6 Mitgliedern repräsentiert. Das prominenteste Mitglied, CTGF, ein 'downstream mediator' des TGF-beta1 Signalweges, wurde als ein möglicher Marker für die Diagnose fibrosierender Erkrankungen erkannt. Aufgrund der entgegengesetzten Wirkung bezüglich der Matrixproteinsynthese und der Expression des jeweils anderen Proteins zeigen CTGF und NOV in vitro eine Art Ying/Yang Beziehung. Zur Untersuchung von strukturellen Details sowie der biologischen Funktion beider Proteine wurden zwei Strategien verfolgt. Zum einen wurden im Rahmen dieser Arbeit st...
Die Familie der CCN-Proteine wird derzeit von 6 Mitgliedern repräsentiert. Das prominenteste Mitglied, CTGF, ein 'downstream mediator' des TGF-beta1 Signalweges, wurde als ein möglicher Marker für die Diagnose fibrosierender Erkrankungen erkannt. Aufgrund der entgegengesetzten Wirkung bezüglich der Matrixproteinsynthese und der Expression des jeweils anderen Proteins zeigen CTGF und NOV in vitro eine Art Ying/Yang Beziehung. Zur Untersuchung von strukturellen Details sowie der biologischen Funktion beider Proteine wurden zwei Strategien verfolgt. Zum einen wurden im Rahmen dieser Arbeit stabil transfizierte 293 Zellklone für die Expression von hCTGF etabliert. Zum anderen wurde rNOV mit Hilfe eines adenoviralen Expressionssystems in COS-7 Zellen überexprimiert. Die sezernierten, rekombinanten Proteine wurden aus dem Kulturüberstand der Zellen isoliert. Es konnten auf diese Art und Weise ausreichende Mengen beider Proteine für Strukturanalysen und funktionelle Studien aufgereinigtwerden. Die vorliegende Arbeit beschreibt die Analyse und Charakterisierung von zwei Mitgliedern der CCN Proteinfamilie und verbindet die Daten mit den zellbiologischen Ergebnisse aus anderen Arbeiten.
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