Purificação da superóxido dismutase a partir do isolado bacteriano
Purificação de superóxido dismutase
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As células foram colhidas de culturas bacterianas isoladas por centrifugação e foram suspensas em tampão Tris-HCl de pH 8,0. A densidade óptica (D.O.) das células foi medida a 600nm e cada vez que células de 21,5 densidades ópticas (D.O.) foram perturbadas e usadas para a purificação da enzima.Purificação da superóxido dismutase de SPB-13.Ométodo de precipitação de sulfato de amônio foi usado para concentrar as proteínas.Depois disso, a enzima foi ainda purificada pela coluna DEAE-Sepharose. A coluna DEAE-Sepharose foi carregada com 3ml de proteína concentrada.A atividade en...
As células foram colhidas de culturas bacterianas isoladas por centrifugação e foram suspensas em tampão Tris-HCl de pH 8,0. A densidade óptica (D.O.) das células foi medida a 600nm e cada vez que células de 21,5 densidades ópticas (D.O.) foram perturbadas e usadas para a purificação da enzima.Purificação da superóxido dismutase de SPB-13.Ométodo de precipitação de sulfato de amônio foi usado para concentrar as proteínas.Depois disso, a enzima foi ainda purificada pela coluna DEAE-Sepharose. A coluna DEAE-Sepharose foi carregada com 3ml de proteína concentrada.A atividade enzimática foi registrada apenas em frações variando entre 22, 23, 24, 25, 26, 27 e 28. Estas frações foram pesquisadas em conjunto. As frações pesquisadas junto com a enzima bruta foram verificadas quanto à pureza pela SDS-PAGE.A atividade máxima de superóxido dismutase da SPB-13 foi encontrada em tampão Tris-HCl, molaridade 60mM, pH 8,0, tempo de incubação 2,0 minutos, temperatura de incubação 450C. Foi encontrada uma concentração enzimática de 10µg como ótima. A termoestabilidade da superóxido dismutase foi verificada e a enzima foi encontrada como termoestável até550Cpor 60 minutos.
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