Tissue Culture Techniques (eBook, PDF)
An Introduction
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ACKNOWLEDGMENTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xl II INTRODUCTION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I STERILITY . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Aseptic Technique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Physical manipulations . Use of the sterile cabinet (hood) Sterilization Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Heat . Radiation . Toxic gas . Filtration . Antibiotics Quality Con...
ACKNOWLEDGMENTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xl II INTRODUCTION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I STERILITY . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Aseptic Technique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 Physical manipulations . Use of the sterile cabinet (hood) Sterilization Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Heat . Radiation . Toxic gas . Filtration . Antibiotics Quality Control of Sterilization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 Routine labeling Suggested Readings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 vi CONTENTS ROUTINE CELL CULTURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 Feeding Schedules and Media Components . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 General properties of media and salt solutions . water as a reagent· Establishingfeeding schedules Subcultivation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Solutions and methods for adherent cells . Common enzyme solutions . Inoculating (seeding) the cultures Cell Enumeration and Cell Viability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54 Hemocytometer . Particle counter . Cell viability Putting Routine Methods to Work . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63 Normal cell growth characteristics Detecting and Disposing of Contamination . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66 Bacteria and fUngi . Fungi . Mycoplasma . Viruses . Dealing with contamination Troubleshooting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73 Inadequate cell growth . Recurrent contamination . When to call your vendor Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80 Biological hazards . Chemical hazards Suggested Readings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Problem Set . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89 EXPERIMENTS IN CULTURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 II Alterations of the Media . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 Serum . Treatments of serum . Plasma-derived serum . Serum-free and low-protein media Substrata. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101 Coatingplasticware with solutions . Alterations with polymers . Using cells to coat the plasticware . Culturing cells on microcarriers Altering the Environment. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106 Temperature changes . Gaseous changes Problem Set . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 Exercises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110 CONTENTS vii PRIMARY CELL CULTURE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113 Isolation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114 Dissection . Enzymatic dissociation methods . Nonenzymatic isolation . Purification of cell suspensions . Consideringyield and survival Chatacterization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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