Reinigung des als Fusionsprotein in E. coli exprimierten Wachstumsfaktors
Reinigung von Insulin-ähnlichem Wachstumsfaktor, ausgedrückt als Fusionsprotein in pBR322 VECTOR IN E.Coli
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Eschericia coli ist ein häufig verwendeter Wirt, da es die Proteinexpression durch seine relative Einfachheit, seine kostengünstige und schnelle Kultivierung mit hoher Dichte, die bekannte Genetik und die große Anzahl kompatibler molekularer Werkzeuge erleichtert. Es wurde beobachtet, dass Affinitätsmarkierungen die Proteinausbeute verbessern, die Proteolyse verhindern und die Löslichkeit in vivo erhöhen. Die Reinigung von His-markierten Proteinen basiert auf der Verwendung eines chelatisierten Metallions als Affinitätsligand. Enterokinasen werden im Allgemeinen zum Verdau von Fusionspr...
Eschericia coli ist ein häufig verwendeter Wirt, da es die Proteinexpression durch seine relative Einfachheit, seine kostengünstige und schnelle Kultivierung mit hoher Dichte, die bekannte Genetik und die große Anzahl kompatibler molekularer Werkzeuge erleichtert. Es wurde beobachtet, dass Affinitätsmarkierungen die Proteinausbeute verbessern, die Proteolyse verhindern und die Löslichkeit in vivo erhöhen. Die Reinigung von His-markierten Proteinen basiert auf der Verwendung eines chelatisierten Metallions als Affinitätsligand. Enterokinasen werden im Allgemeinen zum Verdau von Fusionsproteinen verwendet, da sie das Ziel auf der C-terminalen Seite der Erkennungssequenz spalten, was die vollständige Entfernung von Affinitätsmarkierungssequenzen ermöglicht. Es wurde eine Studie durchgeführt, bei der E. coli-Zellen durch Ultraschallbehandlung lysiert wurden, um lösliches Fusionsprotein zu gewinnen, und dann durch Tangentialflussfiltration (TFF) unter Verwendung eines Flachplattenkassettenmoduls filtriert wurden. Das filtrierte Protein wurde unter Verwendung von Anionenaustauschchromatographie gefolgt von Pseudoaffinitätschromatographie gereinigt. Das Fusionsprotein wurde durch rekombinanten Enterokinase-Verdau gespalten, um den Fusionspartner vom interessierenden Protein zu trennen. Die Gesamtrückgewinnung des gewünschten Proteins betrug 24,7%.
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