Recombinaison homologue à l''échelle de la molécule unique
Dynamique de la réparation des cassures de l''ADN à l''aide de technique de nanomanipulation de l''ADN
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Ce mémoire de thèse est dédié à l'étude de la réparation des cassures doubles brins de l'ADN par recombinaison homologue. Afin de mieux comprendre les mécanismes de recombinaison, nous avons utilisé des techniques de molécule unique nous permettant d'observer in vitro la reparation de l'ADN avec une résolution temporelle et spaciale jusqu'alors jamais atteinte. Nous avons tout d'abord utilisé une technique de pinces magnétiques pour étudier les protéines centrales de la recombinaison: RecA chez E.coli et hRad51 chez l'Homme. Nous avons ensuite devolepper de nouvelles techniques ...
Ce mémoire de thèse est dédié à l'étude de la réparation des cassures doubles brins de l'ADN par recombinaison homologue. Afin de mieux comprendre les mécanismes de recombinaison, nous avons utilisé des techniques de molécule unique nous permettant d'observer in vitro la reparation de l'ADN avec une résolution temporelle et spaciale jusqu'alors jamais atteinte. Nous avons tout d'abord utilisé une technique de pinces magnétiques pour étudier les protéines centrales de la recombinaison: RecA chez E.coli et hRad51 chez l'Homme. Nous avons ensuite devolepper de nouvelles techniques de molecules uniques en les appliquant à l'étude de la recombinaison homologue. En particulier, nous présentons un montage original appelé "tomopinces" permettant de combiner une pince magnétique à de la microscopie en fluorescence. Nous montrons qu'il est ainsi possible d'étirer une molécule unique d'ADN, de la contraindre en torsion tout en visualisant des molécules. Cette étude nous a permis de mieux comprendre la dynamique des complexes ADN/protéines lors de la réparation des cassures doubles brins par recombinaison homologue.
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