Purificação do fator de crescimento expresso como proteína de fusão em E. coli
Purificação do fator de crescimento semelhante à insulina expresso como uma proteína de fusão no VETOR pBR322 EM E. coli
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Eschericia coli é um hospedeiro frequentemente utilizado, pois facilita a expressão de proteínas por sua relativa simplicidade, seu cultivo barato e rápido em alta densidade, a genética bem conhecida e o grande número de ferramentas moleculares compatíveis disponíveis. Observou-se que os marcadores de afinidade melhoram o rendimento da proteína, evitam a proteólise e aumentam a solubilidade in vivo. A purificação de proteínas marcadas com his é baseada no uso de um íon metálico quelado como um ligante de afinidade. As enterocinases são geralmente utilizadas para a digestão de...
Eschericia coli é um hospedeiro frequentemente utilizado, pois facilita a expressão de proteínas por sua relativa simplicidade, seu cultivo barato e rápido em alta densidade, a genética bem conhecida e o grande número de ferramentas moleculares compatíveis disponíveis. Observou-se que os marcadores de afinidade melhoram o rendimento da proteína, evitam a proteólise e aumentam a solubilidade in vivo. A purificação de proteínas marcadas com his é baseada no uso de um íon metálico quelado como um ligante de afinidade. As enterocinases são geralmente utilizadas para a digestão de proteínas de fusão à medida que clivam o alvo no lado do terminal C da sequência de reconhecimento, permitindo a remoção completa das sequências de marcadores de afinidade. Foi realizado um estudo em que as células de E. coli foram lisadas por ultra-sonicação para recuperar a proteína de fusão solúvel e, em seguida, filtradas por filtração de fluxo tangencial (TFF) usando módulo de cassete de placa plana. A proteína filtrada foi purificada usando cromatografia de troca aniônica seguida por cromatografia de pseudoafinidade. A proteína de fusão foi clivada por digestão com enteroquinase recombinante para separar o parceiro de fusão da proteína de interesse. A recuperação geral da proteína desejada foi de 24,7%.
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