Isolierung und Charakterisierung eines Promotors des Copalyl-Diphosphat-Synthase-Gens
aus Salvia Miltiorrhiza
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Das vorgestellte Material betrifft die Klonierung des Promotors und die In-silico-Identifizierung von cis-aktiven Elementen, die im Copalyl-Diphosphat-Synthase-Gen (CPS) von Salvia miltiorrhiza lokalisiert sind. Die Pflanze ist aufgrund ihrer bedeutenden biologischen Aktivität, die von Terpenoidverbindungen namens Tanshinone abhängt, medizinisch interessant. Da die Stoffwechselwege der Tanshinon-Biosynthese noch nicht vollständig aufgeklärt sind, haben wir uns entschlossen, den unbekannten Aspekt der Transkriptionsregulation von CPS, dem für die Tanshinon-Biosynthese entscheidenden Enzym,...
Das vorgestellte Material betrifft die Klonierung des Promotors und die In-silico-Identifizierung von cis-aktiven Elementen, die im Copalyl-Diphosphat-Synthase-Gen (CPS) von Salvia miltiorrhiza lokalisiert sind. Die Pflanze ist aufgrund ihrer bedeutenden biologischen Aktivität, die von Terpenoidverbindungen namens Tanshinone abhängt, medizinisch interessant. Da die Stoffwechselwege der Tanshinon-Biosynthese noch nicht vollständig aufgeklärt sind, haben wir uns entschlossen, den unbekannten Aspekt der Transkriptionsregulation von CPS, dem für die Tanshinon-Biosynthese entscheidenden Enzym, zu entschlüsseln. Wir haben zahlreiche cis-aktive Motive sowie homologe Transfaktoren identifiziert, die möglicherweise bei der Regulation des CPS-Gens von S. miltiorrhiza aktiv sind. Die Analyse der Transfaktor-Gene, die gemeinsam mit A. thaliana CPS exprimiert werden, und ihr Vergleich mit den Transfaktoren, die durch In-silico-Suchen des S. miltiorrhiza CPS-Promotors identifiziert wurden, ergab keine gemeinsamen Proteine. Um die Ergebnisse der In-silico-Suchen experimentell zu validieren, wurde der Einfluss von Auxin, Gibberellin, Salicylsäure und hoher Salzkonzentration auf die Promotoraktivität untersucht: Die gus-Genexpression wurde 0, 12, 24, 48, 72 und 96 Stunden nach der Hormonbehandlung oder während einer 96-stündigen Exposition gegenüber 100 mM NaCl gemessen.
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