Extracção de ADN a partir de tecido epitelial de lesma
Comparação de diferentes métodos de extração de DNA genômico em lesmas de pragas(Molusca: Gastropoda)
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O objetivo da pesquisa foi comparar três protocolos: Extração com SDS; Extração com CTAB e 2¿-mercaptoetanol e Extração com SDS e proteinase K, para determinar o método mais adequado para obter DNA de alto peso molecular e pureza em tecido epitelial de lesma: subfoco Arion e Deroceras reticulatum. A concentração e pureza de DNA foram estimadas espectrofotometricamente (absorvância a 260 nm e relação Abs260/Abs280 nm). Foi utilizado um desenho completamente aleatório com seis réplicas. Diferenças significativas (p
O objetivo da pesquisa foi comparar três protocolos: Extração com SDS; Extração com CTAB e 2¿-mercaptoetanol e Extração com SDS e proteinase K, para determinar o método mais adequado para obter DNA de alto peso molecular e pureza em tecido epitelial de lesma: subfoco Arion e Deroceras reticulatum. A concentração e pureza de DNA foram estimadas espectrofotometricamente (absorvância a 260 nm e relação Abs260/Abs280 nm). Foi utilizado um desenho completamente aleatório com seis réplicas. Diferenças significativas (p<0,01) foram detectadas para quantidade, concentração e pureza entre protocolos. O protocolo (SDS e proteinase K) permitiu obter DNA com maior peso molecular (2 514,90±291,56) e pureza (1,97±0,02). A qualidade do DNA de cada protocolo foi verificada por PCR-RAPD, observando-se pouca reprodutibilidade para o primer OPA-02 (protocolo SDS); enquanto nos outros métodos foram observados perfis de amplificação de alta resolução e bandas reprodutíveis. Recomenda-se a utilização do protocolo SDS e da proteinase K, para obter DNA genômico de alto peso molecular, qualidade e pureza em lesmas.
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