Desarrollo de Ensayos Competitivos para la Detección de Endotoxinas
Síntesis de Conjugados de Lipopolisacárido y su Aplicación en Ensayos Competitivos con Transducción Electroquímica
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La sepsis y el shock séptico son serias causas de muerte. Estas condiciones pueden iniciarse por una liberación masiva de lipopolisacárido (LPS) proveniente de la pared celular de bacterias Gram-negativas. Actualmente, el ensayo enzimático del lisado de amebocitos del Limulus Polyphemus (LAL) se utiliza ampliamente en la cuantificación de LPS en muestras clínicas y no clínicas. Sin embargo, este procedimiento posee ciertas limitaciones. En el presente trabajo se estudiaron distintas estrategias para la síntesis de conjugados de LPS de Salmonella Minnesota con diversas sondas incluyendo...
La sepsis y el shock séptico son serias causas de muerte. Estas condiciones pueden iniciarse por una liberación masiva de lipopolisacárido (LPS) proveniente de la pared celular de bacterias Gram-negativas. Actualmente, el ensayo enzimático del lisado de amebocitos del Limulus Polyphemus (LAL) se utiliza ampliamente en la cuantificación de LPS en muestras clínicas y no clínicas. Sin embargo, este procedimiento posee ciertas limitaciones. En el presente trabajo se estudiaron distintas estrategias para la síntesis de conjugados de LPS de Salmonella Minnesota con diversas sondas incluyendo, dansilo, biotina, peroxidasa de rábano picante (HRP) y complejos electroactivos. Los conjugados con biotina y HRP se utilizaron en el desarrollo de ensayos amperométricos para la detección de LPS. La configuración de los ensayos involucró una superficie de oro modificada con un polímero hidrofílico y un agente de reconocimiento específico de LPS. La modificación de la superficie de oro con polímeros hidrofílicos permitió minimizar la interacción inespecífica de los componentes del ensayo con la superficie. El ensayo basado en el conjugado LPS-HRP alcanzó un límite de detección de 0,06 UE/mL.
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