Clonage des Gènes sodA et msrA de Corynebacterium glutamicum
Identification du Cofacteur Métallique de la Superoxyde Dismutase et l¿Expression sous Stress Oxydatif et Radiatif
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Les objectifs de ce travail sont de définir le métal fixé à la Superoxyde Dismutase (SOD) de Corynebacterium glutamicum et d'étudier la régulation du gène sodA. Les expériences ont montré que l'enzyme est une MnSOD stricte (non-cambialistique). L'analyse du locus chromosomique a permis d'identifier dans l'environnement de sodA, un second gène (msrA, codant un peptide méthionine sulfoxyde réductase), potentiellement impliqué dans la réponse au stress oxydatif. L'analyse de la région promotrice sodA-msrA n'a pas permis de mettre en évidence les sites de fixation des régulateurs ...
Les objectifs de ce travail sont de définir le métal fixé à la Superoxyde Dismutase (SOD) de Corynebacterium glutamicum et d'étudier la régulation du gène sodA. Les expériences ont montré que l'enzyme est une MnSOD stricte (non-cambialistique). L'analyse du locus chromosomique a permis d'identifier dans l'environnement de sodA, un second gène (msrA, codant un peptide méthionine sulfoxyde réductase), potentiellement impliqué dans la réponse au stress oxydatif. L'analyse de la région promotrice sodA-msrA n'a pas permis de mettre en évidence les sites de fixation des régulateurs éventuels sauf des sites éventuels de fixation de OxyR et IHF. La régulation des gènes sodA et msrA a été étudiée par le suivi des variations de l'expression du gène lacZ de E. coli, gène rapporteur placé sous le contrôle des séquences en amont de sodA et de msrA. Des fusions traductionnelles ont été construites, et intégrées dans le génome de C. glutamicum. Diverses conditions environnementales de stress oxydatif, radiatif, thermique, ainsi que l'ajout de métaux in vivo ont été étudiées. Une étude in silico pour chercher les régulateurs éventuels dans le génome de C. glutamicum a été effectuée.
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