Les processus de cancérisation font souvent intervenir des acteurs régulateurs du cycle de division cellulaire. Leur étude est donc essentielle pour la compréhension de la pathogenèse de différents cancers. La progression des cellules dans le cycle cellulaire est gouvernée par une famille de complexes à activité protéine kinase régulée notamment par les phosphatases CDC25. Trois phosphatases CDC25 ont été identifiées dans les cellules de mammifères, et lors de notre travail, nous avons étudié la phosphatase CDC25B. Dans des cellules d'adénocarcinome humain, nous avons montré que CDC25B présente une localisation nucléaire, cytoplasmique ou pan-cellulaire dont nous avons pu identifier les bases moléculaires. L'isolement de nouveaux partenaires protéiques de CDC25B a été entrepris par leur co-purification grâce à l'utilisation de lignées d'ostéosarcome ou de protéines recombinantes. Les approches sont détaillées et proposent des stratégies pour l'identification d'interactomes de protéines d'intérêt. Dans ce contexte et sur la base d'expériences parallèles in vitro, nous avons pu identifier un nouvel interactant protéique de CDC25B : la protéine kinase Eg3.